ความเป็นมาและวัตถุประสงค์
เชื้อราเป็นแหล่งของสารต้นจุสินทรีย์ที่รู้จักันมานานตั้งแต่มีการค้นพบยาเพนนิซิลลิน โดยเชื้อราที่ศึกษาส่วนใหญ่นั้นแยกได้จากดิน ราตินเป็นแหล่ผลิตที่สำคัญแหล่งหนึ่งของผลิตภัณฑ์ธรมชาติที่ไม่เพียงแต่มีความหลากหลายของโครงสร้างทางเคมีทนั้น แต่ยังมีความน้ำสนใจในแง่ของการออกฤทธิ์ทางชีวภาพอีกด้วยTrichoderma asperellum PSU-PSF14 เป็นราดินที่แยกได้จากดินอินทรีย์ในพื้นที่พรุโต๊ะแดง จังหวัดนราธิวาส จากการศึกษาเบื้องตันพบว่สารสกัดหยาบจากน้ำเลี้ยงเชื้อ (B) ของเชื้อรา Pรบ-PSF14 แสดงฤทธิ์ต้านเชื้อแบคที่เรีย Stophylococcus aureus และต้านเชื้อรา Candida albicons ด้วยค่า MC ที่เท่ากันคือ200 มย/m. อีกทั้งส่วน BE และสารสกัดหยาบจากเซลล์ (C) ยังแสดงฤทธิ์ต้านเชื้อรา Gyptococcus nefommnร ด้วยค่ MC ที่นสนใจ คือ 64 และ 32 นยmL ตามลำดับ สำหรับส่วน CE ของเชื้อรานี้ยังแสดงฤทธิ์ความเป็นพิษต่อเซลล์มะเร็งช่องปากและเชลล์ปกติด้วยค เC เท่ากับ 20.72 และ 48.88 pg/mL ตามลำดับ ประกอบกับข้อมูล 'H NMR สเปกตรัมของสารสกัดหยาบปรากฎสัญญาณหลักของกลุ่มสารอะโรมาติกและหม่มริล จึงทำให้ผู้วิจัยสนใจที่จะศึกษาการแยกเทาบอไลท์จากเชื้อราดังกล่าว โดยคาดว่าจะสามารถแยกผลิตภัณฑ์ธรรมชาติสารใหม่และสารที่มีรายงานโครงสร้างแล้วที่มีประโยชน์ทางเภสัชวิทยาได้
วัตถุประสงค์
1. แยกสารบริสุทธิ์ที่ผลิตโดยเชื้อราดิน T. asperellum PSU-PSF14
2. ทดสอบฤทธิ์ทางชีวภาพของสารบริสุทธิ์ที่แยกได้ ได้แก่ ฤทธิ์ต้านจุลินทรีย์ และฤทธิ์ความเป็นพิษต่อ
เชลล์มะเร็งเต้านมและมะเร็งช่องปาก ตลอดจนเชลล์ปกติ
ระเบียบวิธีดำเนินการวิจัย
1. การเพาะเลี้ยงเชื้อราในอาหารเหลว
นำเชื้อรา T. asperellum PSU-PSF14 ไปเพาะเลี้ยงในอาหารเหลว potato dextrose broth
(PDB) ปรึมาตร 10 ลิตร ที่อุณหภูมิห้อง เป็นเวลา 4 สัปดาห์
2. การศึกษาทางเคม
2.1 การเตรียมส่วนสกัดหยาบ
กรอง culture broth แยกเอาเส้นใยราออก แล้วสกัดน้ำเลี้ยงเชื้อด้วยเอทิลอะซีเหตจำนวน 2 ครั้ง
จากนั้นนำสารละลายเอทิลอะซีเหตไประเหยแห้งด้วยเครื่อง rotary evaporator จะได้สารสกัดหยาบ BE
สำหรับเส้นยนำมาแซ่เมทานอลเป็นเวลา 3 วัน ระเหยมธานอลออกบางส่วน เติมน้ำ แล้วทำการสกัดตัวยตัว
ทำละลายฮกเซน ได้ชันฮกเซและชั้นน้ำ ชั้น้ำนำมาสกัดตัวยวิธีการเดียวกันกับส่วนน้ำเลี้ยงเชื้อ จะได้สาร
สกัดหยาบ CE
2.2 การแยกส่วนสกัดหยาบให้บริสุทธิ์
เริ่มด้วยการตรวจสอบองค์ประกอบทางเคมีของสารสกัดหยาบ ด้วยโครมาโทกราฟีแผ่นบาง
ชนิคตรรมดาและ/หรือขนิด reversed-phase Rp-18 โตยใช้ระบบตัวเคลื่อนที่แบบต่งๆ จากนั้น
ตรวจสอบสภาพการละลายของส่วนสกัดหยาบในตัวทำละลายอินทรียต่ง ๆ เช่น ปิโตรเลียมอีเทอร์ ได